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氣相色譜柱的日常維護和常規(guī)保養(yǎng)

更新日期: 2017-02-08
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    色譜柱利用色譜柱先將混合物分離,然后利用檢測器依次檢測已分離出來的組分。色譜柱的直徑為數毫米,其中填充有固體吸附劑或液體溶劑,所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定相相對應的還有一個流動相。流動相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應的氣體,一般為氮或氫氣。待分析的樣品在色譜柱頂端注入流動相,流動相帶著樣品進入色譜柱,故流動相又稱為載氣。載氣在分析過程中是連續(xù)地以一定流速流過色譜柱的;而樣品則只是一次一次地注入,每注入一次得到一次分析結果。
    在實驗過程中經常遇到的情況: 
   ·新的色譜柱,直接上分析條件來分析樣品,發(fā)現分離情況不穩(wěn)定。
   ·新的色譜柱,使用中發(fā)現壓力突然升高。
   ·新的色譜柱,發(fā)現分離度、保留時間發(fā)生了變化。
   ·色譜柱使用不頻繁,一開始分析樣品效果比較好,但是,在使用過程中發(fā)現柱效下降快、峰形異常的情況。
   ·色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
   當發(fā)生以上情況,請仔細檢查,是否有某個操作疏忽了?
   1)測試柱性能
   通常情況下,我們建議用戶在拿到色譜柱后,*件事情就是在一臺性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說明書對色譜柱進行柱效測試。其實,對于一個合格的色譜分析工作者來說,拿到一根新色譜柱,要開始一個課題之前,都會這樣做,目的有二:1、了解色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。2、將檢測結果小心保存, 當實驗過程中發(fā)現異常時,在檢測柱效進行對比,來進一步排查原因。
   2)當反相使用高濃度緩沖鹽時,注意過渡
   在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時,一定要注意應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現系統(tǒng)壓力升高異常時,要仔細檢查,段段排除包括保護柱、混合器、管路或者流通池等。
   3)當更換色譜柱時,原來的實驗情況發(fā)生變化
   首先,如果之前開發(fā)方法時色譜柱已經做過別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動相對這個樣品分析可能有干擾,只能重新找條件。建議:開發(fā)方法時使用新的色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術不同,造成了選擇性的細微差異 ,需要調整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會改變)。再次,如果是更換了同品牌型號的新的色譜柱發(fā)生這種情況,請檢查之前分離時目標與雜質的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開始只是勉強分開(Rs小于1.5),那只能說明方法沒有優(yōu)化好,需要再次進行優(yōu)化。
   4)樣品及前處理
   樣品要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。流動相中所使用的各種有機溶劑要使用色譜純,配流動相的水好是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
   5)色譜柱基線問題
   通常情況,基線問題是由于系統(tǒng)或者流動相引起的,和色譜柱關系不大。
可能導致的原因:
(1)泵頭進氣泡
(2)系統(tǒng)污染
(3)流通池漏液
(4)流動相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測波長不合適)
(5)檢測波長低,水的質量不好等等。
6)色譜柱沖洗保養(yǎng)
   當使用了緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇水溶液沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入至少10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。還有就是不能在這個工作上面打折扣,否則,一些保留強的雜質沒有洗脫下來,只能是給后面的工作帶來更大的麻煩。如色譜柱要長時間保存,可以儲存于純甲醇或乙腈中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度好是室溫。

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